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来源:科微学术收集编辑:江文玲等
标题
单增李斯特菌末端氧化酶亚基QoxB的生物学功能探究
作者
江文玲,徐加利,董欣楠,沈云勤,陈丹丹,江玲丽,宋厚辉,程昌勇
摘要
【目的】本研究旨在构建单增李斯特菌末端细胞色素aa3氧化酶亚基qoxB基因缺失株,并探索其在细菌生长及感染过程中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建获得缺失株ΔqoxB后,对野生株EGD-e和缺失株ΔqoxB的生长能力、细菌运动能力和细胞内黏附、侵袭、增殖及胞内迁移能力进行比较,同时利用荧光定量PCR方法检测ΔqoxB中鞭毛相关基因转录水平的变化。【结果】缺失qoxB基因后细菌在体外培养过程中生长能力没有差异,细菌的鞭毛运动能力显著降低,在30 ℃培养24 h和48 h后ΔqoxB运动圈直径分别较EGD-e下降35.86%和34.20%,且22个鞭毛相关基因转录水平显著降低。通过细胞感染试验发现缺失qoxB基因后细胞黏附、侵袭、增殖及胞内迁移能力均显著下降。【结论】本研究首次证实末端氧化酶亚基QoxB能降低单增李斯特菌的运动能力和对细胞的感染能力,此研究为进一步阐明末端细胞色素氧化酶影响单增李斯特菌的致病机制提供重要依据。
图片摘要
图1 qoxB基因缺失株重组质粒pSL2886的构建策略
图2 qoxB基因缺失株的PCR鉴定和测序结果分析
图3 EGD-e和ΔqoxB在不同温度下培养的生长曲线测定
图4 EGD-e和ΔqoxB的运动能力分析
图5 EGD-e和ΔqoxB在Caco-2细胞中的黏附率和侵袭率分析
图6 EGD-e、ΔqoxB和Δhly在RAW264.7巨噬细胞内增殖能力分析
图7 EGD-e、ΔqoxB和Δhly在L929细胞间的迁移能力分析
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