天然异胡椒醇作为一种植物来源香料，具有很高的经济价值。目前国内外还未见利用大肠杆菌工程菌株转化生产异胡椒醇的报道。【目的】构建工程菌，采用生物合成方法获得天然香料异胡椒醇。【方法】对来自胡椒薄荷的细胞色素P450家族的柠檬烯-3-羟化酶(LIM3H)基因PM2进行改造，截短LIM3H的N端疏水区，分别添加17α短肽或2B1短肽增加其亲水性，采用CO差示光谱法检测LIM3H活性；将N端疏水区截短后的来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的NADPH-细胞色素P450还原酶基因(trATR)和修饰后LIM3H基因(Modi-LIM3H)融合后表达，最终以柠檬烯为底物进行全细胞转化。【结果】3种N端修饰LIM3H基因均检测到LIM3H表达和异胡椒醇生成，其中17α短肽修饰后的蛋白表达量最高，异胡椒醇产量达到1.94 mg/L。【结论】本研究在大肠杆菌中增加外源LIM3H与ATR，成功催化柠檬烯生成异胡椒醇，为天然异胡椒醇的生产提供了新的方法。