文题释义：
原代神经元细胞：是中枢神经系统重要的组成部分，此种细胞可用作神经系统体外疾病模型，并广泛运用于神经细胞生物学特性和外源干扰因素的疾病研究中，其在神经生物学、发育生物学体外实验研究中扮演重要角色。
细胞疾病模型：是一种能在体外培养并能模拟人类疾病的新型技术，在疾病药理学、个体化治疗、病理生理发生机制及再生医学研究中均具有巨大的运用潜能，弥补了许多疾病无法用动物模拟且构建的动物模型存在个体差异等缺点，同时此项技术为人类疾病的研究奠定了基础。
背景：近年来原代神经元细胞模型在颅脑疾病中扮演着重要的角色，此类细胞模型特性更加贴近于疾病细胞，可用于模拟研究各类神经系统疾病。
目的：建立一种便捷实用的可同时提取皮质及海马原代神经元的培养方法。
方法：取新生24 h内的SD大鼠，麻醉后断脊法处死，采用体积分数为75%乙醇消毒，用镊子分离出颅骨及脑膜，解剖出完整大脑，剥离脑血管膜，游离出大脑皮质及海马组织，采用木瓜蛋白酶及适量DNA酶顺序消化方案，吹打、离心、过滤，然后接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板和爬片内，以含体积分数10%胎牛血清的DMEM-F12培养基为种植液，6 h后换用含有B27的Neurobasal无血清专用培养基，持续培养7 d后，显微镜下观察细胞形态及生长状态。分别采用β-Tubulin免疫荧光法、Neun抗体免疫组化法鉴定皮质神经元与海马神经元，以及采用MAP2免疫荧光法鉴定其纯度。
结果与结论：①接种24 h后细胞体积变清晰，呈不规则圆形、周围环绕光晕，少数细胞已有细小突起，均已贴壁生长；持续培养3 d后，胞体逐步增大，部分呈聚团性生长，突触延长，细胞间出现交联；持续培养7 d后，胞体成熟饱满，细胞质显著增多，光晕增强，形成更为密集的神经元网络；②经Neun抗体免疫组化法、β-Tubulin免疫荧光法鉴定为神经元，神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定皮质神经元和海马神经元纯度分别为(94.00±0.34)%和(91.00±0.26)%，可用于后期实验；③结果表明，采用同一批24 h内新生SD大鼠分离大脑皮质和海马组织，经木瓜蛋白酶与DNA酶顺序消化后，可提取到优质的海马神经元及皮质神经元。该方案得到的神经元纯度高，操作简化，可作为研究各类神经系统疾病细胞模型的基础。
https://orcid.org/0000-0001-7324-248X (廖益东)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
关键词: 新生SD大鼠, 皮质神经元, 海马神经元, 原代培养, 神经疾病, 细胞模型
引用本文: 廖益东, 明 江, 宋文学, 王梓力, 张 宇, 廖一飞, 徐卡娅, 杨 华. 一种同时培养原代皮质及海马神经元的实验方法[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(6): 897-902.
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