摘要：

文题释义：

体外杀伤实验：杀伤功能是机体免疫功能的一个重要方面，免疫系统中有多种具有杀伤功能的细胞，如自然杀伤细胞、细胞毒性T细胞等。体外杀伤实验是指在体外模拟体内条件，进而检测对某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞杀伤活性的实验。

背景：从深低温冻存脐血中获得大量高纯度无滋养层细胞、无动物源成分的NK细胞，以便更好地开展NK细胞杀伤肿瘤的实验研究，此次研究通过使用NK扩增培养试剂盒和血清替代物，以获得安全、高效的体外扩增培养NK细胞的方法。

目的：建立一种从冷冻脐血中采用纯细胞因子扩增NK细胞的技术体系并证明其体外杀瘤能力。

方法：解冻液氮存储的冻存脐血，优化复苏体系，采用Ficoll密度梯度离心的方法收集脐血单个核细胞，接种于预先铺板的T175培养瓶中，采用细胞因子试剂盒+血清替代物法培养21 d后收集细胞并计数，应用流式细胞术检测细胞中CD3-CD56+的比例，并将所得数据与K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法进行对比分析。同时以髓系白血病细胞K562为靶细胞，采用CCK-8试剂盒检测不同效靶比NK细胞杀伤K562细胞的作用。最后进行了12 h内的模拟储存运输实验，采用流式检测CD3-CD56+的比例变化，并使用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。

结果与结论：①采用K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法扩增培养14 d，细胞扩增(51.47±4.28)倍；采用细胞因子试剂盒+血清替代物法扩增培养21 d，细胞数量5×109以上，细胞扩增(328.32±116.36)倍，细胞扩增倍数明显升高，2种方法获得的CD3-CD56+纯度比例均在80%以上，未见明显差异；②纯细胞因子方法培养后的NK细胞对K562细胞的杀伤效果(效靶比=10∶1)达80%以上；③在12 h的模拟储运实验中，CD3-CD56+的比例变化不明显，直至第12小时，NK细胞凋亡率< 7%；④结果表明：优化复苏体系和纯细胞因子扩增方法可以高效培养出高纯度的NK细胞，同时具有有效杀伤K562肿瘤细胞的能力，且经过12 h储运后仍然具有良好的细胞纯度和较低的凋亡率。

https://orcid.org/0000-0001-5638-3010 (刁小娟)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 冷冻脐血, NK细胞, 因子, 扩增, 细胞毒性, 凋亡率, 配型, 临床应用

引用本文: 刁小娟, 石超群, 李 栋, 王 帅, 肖 春, 刘国军, 曲廷瑜, 杨卫娟, 贾晓鹏. 无动物源成分纯细胞因子从深低温冻存脐血中高效扩增NK细胞[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(10): 1572-1577.

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无动物源成分纯细胞因子从深低温冻存脐血中高效扩增NK细胞